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產(chǎn)品信息

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

溶酶體綠色熒光探針DND-26 是對(duì)活細(xì)胞中的酸性區(qū)室進(jìn)行染色的一種綠色熒光染料，具有 504/511 nm 的最大激發(fā) /發(fā)射波長(zhǎng)。本品以溶于無水DMSO的1mM儲(chǔ)存液形式提供。

使用方法

使用前，先將本品取出回溫至室溫，并對(duì)其進(jìn)行簡(jiǎn)短離心使 DMSO 溶液集中于管底。最佳工作濃度需根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)要求、細(xì)胞類型、細(xì)胞或組織的膜通透性等進(jìn)行優(yōu)化。

1. 工作液的配制

利用培養(yǎng)基或合適的緩沖液將 1mM   儲(chǔ)存液稀釋至工作濃度，推薦工作液濃度為 50-75nM ；

【注意】： 1 ）為了降低探針加載過度可能引起的假陽性，建議在不影響染色效果的情況下盡量使用低濃度。 2 ）若細(xì)胞在染色后于不含染料的培養(yǎng)基中孵育，會(huì)觀察到熒光信號(hào)的衰減和細(xì)胞的空泡化現(xiàn)象。

2.  染色

2.1對(duì)于貼壁細(xì)胞

1 ）將細(xì)胞置于培養(yǎng)皿中的蓋玻片上，加入合適培養(yǎng)基，使其爬片生長(zhǎng)。

2 ）待細(xì)胞生長(zhǎng)到合適豐度，吸除培養(yǎng)液，加入適量 37 ℃預(yù)熱的含探針工作液。于生長(zhǎng)狀態(tài)下孵育 30min ～ 2h （具體孵育時(shí)間需根據(jù)細(xì)胞類型而定）?！咀⒁狻浚簩?duì) 溶酶體綠色熒光探針 DND-26 內(nèi)化過程的動(dòng)力學(xué)研究表明，活細(xì)胞攝取此染料僅需數(shù)秒即可。缺點(diǎn)在于此探針可能引起溶酶體產(chǎn)生“堿性效應(yīng) Alkalizing effect ”，也就是說過長(zhǎng)孵育時(shí)間會(huì)誘導(dǎo)溶酶體 pH 值提高。建議僅當(dāng)該探針于 37 ℃孵育細(xì)胞 1-5min 才可用作 pH 指示劑。

3 ）利用新鮮培養(yǎng)基替換上述染色液并在熒光顯微鏡（含合適濾片）下觀察。若染色不夠充分，建議增加染料濃度或延長(zhǎng)染色時(shí)間。

2.2   對(duì)于懸浮細(xì)胞

1 ）離心，吸除上清。

2 ）利用 37 ℃預(yù)熱的探針工作液重懸細(xì)胞，于生長(zhǎng)狀態(tài)下孵育 30min ～ 2h （具體時(shí)間需根據(jù)細(xì)胞類型而定）。

3 ）離心，吸除染色液，加入新鮮培養(yǎng)液重懸細(xì)胞。

4 ）置于熒光鏡下觀察。若染色不夠充分，建議增加染料濃度或加長(zhǎng)染色時(shí)間。

【注意】：對(duì)于懸浮細(xì)胞，也可將細(xì)胞貼附于經(jīng) BD Cell-Tak 處理過的蓋玻片上，然后使用類似于貼壁細(xì)胞的方法進(jìn)行染色。1）DMSO有毒，使用時(shí)請(qǐng)小心操作。

2）了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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